1.儀器與試藥

1.1　儀器

電感耦合等離子體質(zhì)譜儀；微波消解儀；電子天平；超純水系統(tǒng)。

1.2　試藥

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液[含鋰(Li)、鈹(Be)、鈉(Na)、鎂(Mg)、鋁(Al)、鉀(K)、鈣(Ca)、V、Cr、錳(Mn)、鐵(Fe)、Co、Ni、Cu、鋅(Zn)、鎵(Ga)、As、Se、銣(Rb)、鍶(Sr)、Ag、Cd、銫(Cs)、Ba、Hg、Tl、Pb、鈾(U)各10μg·mL?1，批號：51-116CRY2]、汞標(biāo)準(zhǔn)溶液(含量9.98μg·mL?1，批號：13-7HGY2)、內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液[含鉍(Bi)、鍺(Ge)、銦(In)、Li、鈧(Sc)、鋱(Tb)、釔(Y)各100μg·mL?1，批號：51-082CRY2]和調(diào)諧液[含鈰(Ce)、Co、Li、鈦(Ti)、Y各10μg·mL?1，批號：30-203GSX2]均購于美國Agilent公司；柑橘葉[編號GBW10020(GSB-11)]生物成分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)購于中國地質(zhì)科學(xué)院地球物理地球化學(xué)勘察研究所。硝酸為分析純(65%)，水由超純水系統(tǒng)制得。43種兒科常用中藥口服液體。

2.方法與結(jié)果

2.1　溶液制備

2.1.1　內(nèi)標(biāo)、參比溶液　

精密量取內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2%硝酸溶液配制成濃度為1μg·mL?1的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液；精密量取內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2%硝酸溶液配制成濃度為100ng·mL?1溶液，作為半定量測定的參比溶液。

2.1.2　標(biāo)準(zhǔn)溶液　

取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2%硝酸溶液分別配制成各元素濃度均為1、10、20、50、100、500ng·mL?1的系列混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作為系列標(biāo)準(zhǔn)溶液1；取汞標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2%硝酸溶液分別配制成濃度為0.01、0.1、0.2、0.5、1、2、5ng·mL?1系列汞元素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作為系列標(biāo)準(zhǔn)溶液2。

2.1.3　供試品溶液　

口服溶液劑、合劑(編號：1~34)：精密量取樣品1mL，置消解罐中，加入硝酸8mL，100℃預(yù)消解30min，放冷，密塞，微波消解(消解程序見表2)，放冷，取出。將消解液轉(zhuǎn)移至50mL量瓶內(nèi)，用少量2%硝酸溶液洗滌消解罐3次，合并洗滌液，用2%硝酸溶液定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液1。糖漿劑、膏劑(編號：35~54)：取樣品約1g，精密稱定，置消解罐中，與口服溶液劑、合劑同法配制，作為供試品溶液2。同法平行制備空白溶液。

如定量測定元素超出標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍，用2%硝酸溶液定量稀釋至線性范圍，作為測定該元素的供試品溶液。

2.2　半定量分析

2.2.1　半定量分析儀器參數(shù)　

氦反應(yīng)模式，RF功率1550W，采樣深度8mm，霧化氣流量0.80L·min?1，蠕動泵轉(zhuǎn)速0.3rps，霧化室溫度2℃，補償氣流量0.25L·min?1；質(zhì)譜圖采集模式，峰型6個點，重復(fù)次數(shù)1，掃描次數(shù)100。

2.2.2　半定量分析方法　

檢測包括m/z為7(Li)~238(U)的75種元素。依次采集儀器背景噪音(超純水)、參比溶液、空白對照溶液、54個供試品溶液的數(shù)據(jù)，以參比溶液元素響應(yīng)值及濃度值，計算并更新半定量響應(yīng)因子，繪制半定量靈敏度曲線，見圖1。以靈敏度曲線為基礎(chǔ)，篩查樣品溶液中的元素種類和濃度。

2.2.3　半定量分析結(jié)果　

根據(jù)半定量測定的濃度計算得到樣品中元素的含量。參考ICHQ3D中口服途徑元素雜質(zhì)限量，編號9樣品的Pb殘留量超過規(guī)定限度；參考中國藥典2020年版[4]，編號10、12、26和28樣品的Hg殘留量超過規(guī)定限度；其他元素以及其他的樣品的各元素均在規(guī)定限度范圍以內(nèi)。2.2.4　元素篩選　根據(jù)半定量分析結(jié)果判定元素是否存在或有無定量必要，結(jié)合藥典和ICH指導(dǎo)原則等文獻資料確定定量分析的重金屬及有害元素種類。排除的元素包括6種內(nèi)標(biāo)元素，硼(B)、碳(C)、氮(N)等非金屬元素，日常規(guī)攝入量較多且大部分樣品中含量較高的Na、Mg、K、Ca等元素，含量普遍極低甚至未檢出的金(Au)、鈀(Pd)、銥(Ir)等元素。選定半定量檢出量較大、屬于中國藥典中規(guī)定的重金屬及有害元素或ICHQ3D中規(guī)定的1、2、3類元素雜質(zhì)進行定量分析，包括V、Cr、Co、Ni、Cu、As、Se、Ag、Cd、Ba、Hg、Tl、Pb等13種。

2.3　定量分析

2.3.1　定量分析儀器參數(shù)　

氦反應(yīng)模式，RF功率1550W，采樣深度8mm，載氣流量1.05L·min?1，蠕動泵轉(zhuǎn)速0.10rps，霧化室溫度2℃；質(zhì)譜圖采集模式，峰型3個點，重復(fù)次數(shù)3，掃描次數(shù)100。

2.3.2　定量分析方法　

依次采集系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液1和標(biāo)準(zhǔn)溶液2、空白溶液、54個供試品溶液，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測定樣品中13種元素的含量。按同位素豐度表推薦的質(zhì)量數(shù)選取同位素，分別為51V、52Cr、59Co、60Ni、63Cu、75As、79Se、107Ag、111Cd、137Ba、202Hg、203Tl、208Pb。其中，51V和52Cr以45Sc作內(nèi)標(biāo)，59Co、60Ni、63Cu、75As和79Se以72Ge作內(nèi)標(biāo)，107Ag和111Cd以115In作內(nèi)標(biāo)，137Ba以159Tb作內(nèi)標(biāo)，202Hg、203Tl和208Pb以209Bi作內(nèi)標(biāo)。

2.3.3　線性關(guān)系考察　

取標(biāo)準(zhǔn)溶液1和標(biāo)準(zhǔn)溶液2，進行測定。以每秒計數(shù)值(CPS)為縱坐標(biāo)(Y)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見表3。

2.3.4　檢測限和定量限　

取空白溶液連續(xù)進樣11次，以空白溶液測定值的3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差所對應(yīng)的待測元素濃度作為檢測限，以空白溶液測定值的10倍標(biāo)準(zhǔn)偏差所對應(yīng)的待測元素濃度作為定量限，結(jié)果見表3。

2.3.5　儀器精密度試驗　

取濃度為50ng·mL?1的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液和0.5ng·mL?1的汞元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，各連續(xù)進樣6次，計算13種元素每秒計數(shù)值(CPS)的RSD。結(jié)果見表3，表明儀器精密度良好。

2.3.6　重復(fù)性試驗　

取編號3樣品，按“2.1.3”項下方法平行制備供試品溶液6份，進樣測定各元素的濃度，計算RSD。結(jié)果見表3，表明方法的重復(fù)性良好。

2.3.7　穩(wěn)定性試驗　

取編號3供試品溶液，室溫放置，分別于0、1、3、6、9、12、18和24h進樣測定，計算13種元素CPS的RSD。結(jié)果見表3，表明供試品溶液在24h基本穩(wěn)定。

2.3.8　加樣回收試驗　

取編號3樣品6份，分別精密加入10μg·mL?1混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液200μL和1μg·mL?1汞元素標(biāo)準(zhǔn)品溶液20μL，按“2.1.3”項下方法制備供試溶液，進樣測定，計算13種元素加樣回收率及RSD，結(jié)果見表3，表明方法的準(zhǔn)確度良好。

2.3.9　方法可靠性驗證　

取柑橘葉約0.5g，精密稱定，按“2.1.3”項下方法配制測定溶液、按“2.3.2”項下方法測定，計算含量，結(jié)果見表4。結(jié)果顯示，各元素的測定值均在認定值的可信范圍內(nèi)，表明方法測定的結(jié)果可信。

2.3.10　定量分析結(jié)果　

按“2.3.2”項下方法測定54批樣品，結(jié)果見圖2。參考ICHQ3D中口服途徑元素雜質(zhì)限量，編號9樣品的Pb殘留量超過規(guī)定限度；參考中國藥典2020年版[4]，編號10和26樣品的Hg殘留量超過規(guī)定限度；其他元素以及其他的樣品的各元素均在規(guī)定限度范圍以內(nèi)。

方法來源：[1]周遠華,夏學(xué)深,張立雯,等.基于ICP-MS的兒科常用中藥口服液體制劑的重金屬及有害元素殘留量測定及其風(fēng)險評估[J/OL].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),1-7[2024-09-18].https://doi.org/10.13748/j.cnki.issn1007-7693.20231171.